换一批多重荧光定量PCR检测猪圆环病毒2a、2b和2d基因型方法的建立与应用
Establishment and Application of Multiple Fluorescence Quantitative PCR for Detection of Porcine Circovirus 2a,2b and 2d Genotype
摘要为建立一种检测猪圆环病毒2型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种基因型PCV2a、PCV2b、PCV2d检出并分型.针对3种基因型ORF2基因,在保守序列设计通用引物并分别设计特异TaqMan探针,3条探针分别标记NED、JOE和FAM荧光报告基团,建立多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其灵敏性、重复性和特异性.经条件优化多重荧光定量PCR的反应体系为30 μL,各型探针加样为0.6 μL,退火温度为60℃;最低检测值为PCV2a 100 copies/μL、PCV2b 57 copies/μL和PCV2d 100 copies/μL,而且该方法对猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等其他6种猪源主要病毒核酸检测均为阴性,具有良好的特异性;组内和组间的检测变异系数均小于等于3.6％;通过检测218份阳性样本,结果表明该方法能快速检测猪圆环病毒2型三种主要流行型并同时分型,为PCV2快速分型的诊断提供新方法.
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关键词
猪圆环病毒2型多重荧光定量PCR检测基因型Porcine circovirus type 2multiplex fluorescence quantitative PCRdetectiongenetypes
分类号
S852.651
栏目名称
发布时间
2023-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31972679）
江苏现代农业(生猪)产业技术体系创新团队(JATS(2020)382)（JATS(2020)382）
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