猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibodies Against Recombinant N Protein of Porcine Deltacoronavirus

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摘要为制备猪δ冠状病毒(PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于临床样品中PDCoV抗原的免疫组织化学(IHC)检测,本研究以原核表达的PDCoV N蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,基于纯化的N蛋白建立的间接ELISA方法筛选获得稳定分泌N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体的免疫反应特异性、亚类进行系统鉴定.结果显示:通过3次亚克隆筛选获得8株可分泌PDCoV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经IFA和Western blot分析,证实制备的单克隆抗体均与猪δ冠状病毒反应,且不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)反应,特异性良好.单克隆抗体亚类鉴定结果表明,1A11、3C6、1E7、1E12株单克隆抗体属IgG1型,4F3、2A3株单克隆抗体为IgG2a型,3E4单克隆抗体为IgM型,8株单克隆抗体的轻链均为κ链.利用1A11单克隆抗体对PDCoV、PDEV、TGEV感染猪的空肠、回肠组织进行IHC检测,结果表明1A11能与感染PDCoV的组织发生特异性免疫反应,而不与感染PDEV和TGEV的组织发生反应,特异性良好.本研究制备的PDCoVN蛋白单克隆抗体可为PDCoV诊断方法的建立以及N蛋白的功能研究奠定基础.