换一批
换一批PRRSV GP4蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备
Prokaryotic Expression of PRRSV GP4 Protein and Preparation of Monoclonal Antibodies
摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来巨大经济损失,尽快建立该病毒的快速诊断方法 尤为重要.PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须.本研究为制备GP4单克隆抗体,选取ORF4优势序列优化合成,连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-ORF4;经双酶切验证后,转化至BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并纯化;经SDS-PAGE及Western blot鉴定成功后免疫小鼠,制备筛选单克隆抗体,对制备的单克隆抗体进行验证.结果 表明,GP4蛋白以可溶形式表达,大小为30 kDa;纯化蛋白免疫小鼠后,共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株;所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合.本研究为PRRSV诊断方法 的建立及后续研究奠定了基础.
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白原核表达单克隆抗体Porcine reproductive and respiratory syndrome virusGP4 proteinprokaryotic expressionmonoclonal antibody
分类号
S852.651
栏目名称
发布时间
2024-05-20
基金项目
内蒙古自治区自然科学基金项目（2020MS03047）；
内蒙古农业大学高层次人才引进项目（NDGCC2016-22）
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