换一批鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
Duplex TaqMan MGB Fluorescence Quantitative Real-Time PCR(FQ-PCR)Assay for the Differential Detection of Porcine Circoviruses 2 and 3
摘要建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法.结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3％以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量.对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100％.本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测.
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关键词
猪圆环病毒2型rep基因猪圆环病毒3型cap基因双重TaqMan MGB FQ-PCRPorcine circovirus 2rep geneporcine circovirus 3cap geneduplex TaqMan MGB FQ-PCR
分类号
S852.65
栏目名称
发布时间
2024-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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