换一批
换一批猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立
Prokaryotic Expression of Porcine Circovirus Type 2 Capsid Protein and Preliminary Establishment of Indirect ELISA Antibody Detection Method
摘要Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义.本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒 pCold-Ⅰ-Cap.将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法.结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础.
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关键词
猪圆环病毒2型Cap蛋白同源重组表达纯化ELISAPorcine circovirus type 2Cap proteinhomologous recombinationprotein expression and purificationELISA
分类号
S852.651
栏目名称
研究论文
发布时间
2024-09-03
基金项目
国家自然科学基金
国家现代生猪产业技术体系项目
中国农业科学院创新工程猪病毒性繁殖障碍综合症团队项目
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