猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定

Preparation and Characterization of Monoclonal Antibody 2D7 Against Porcine Deltacoronavirus N Protein

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摘要为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定.结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048 × 106.IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链.该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性.本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持.

作者张宁 ^[1] 赵平 ^[2] 刘思雨 ^[2] 赵硕 ^[3] 陈忠伟 ^[3] 何颖 ^[3] 欧阳康 ^[4] 卢冰霞 ^[3] 蒋家霞 ^[5] 郭旋 ^[6] 林昌华 ^[7] 赵武 ^[3] 黄伟坚 ^[4] 秦毅斌 ^[3] 赵凌 ^[8] 学术成果认领

作者单位华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉 430070;广西桂垦牧业有限公司,南宁 530022 ^[1] 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室,南宁 530001;广西大学动物科学技术学院,南宁 530005 ^[2] 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室,南宁 530001 ^[3] 广西大学动物科学技术学院,南宁 530005 ^[4] 广西职业技术学院,南宁 530226 ^[5] 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司,南宁 530042 ^[6] 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司,贵港 537100 ^[7] 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉 430070 ^[8]

关键词猪德尔塔冠状病毒 N蛋白单克隆抗体 Porcine deltacoronavirus N protein monoclonal antibody

分类号 S852.651

栏目名称 研究论文

发布时间 2024-11-26

基金项目

南宁市优秀青年科技人才项目 桂职院号221103.