换一批稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立
Establishment of THP-1 Cell Line for Stably Expressing Mycobacterium bovis PPE13
摘要为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系.首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒.然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1 μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13.最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性.结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高.该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础.
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分类号
S852.618
栏目名称
发布时间
2024-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
浙江省自然科学基金资助项目（Y21C180001）
浙江省属高校基本科研业务费（2020YQ008）
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