换一批5种分子伴侣促进牛冠状病毒病毒样颗粒可溶性表达的研究
Five Molecular Chaperones Promote Soluble Expression of Bovine Coronavirus Virus-like Particles
摘要为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗,并对其进行免疫效果评价.本研究将5种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞,将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的5种分子伴侣感受态细胞中,各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后,通过SDS-PAGE检测上清液是否表达来筛选有效的伴侣质粒.纯化共表达的重组蛋白,利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒(VLPs).用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平.结果显示:成功制备上清液表达的BCoV VLPs,将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠,小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组(P＜0.05).结果表明,分子伴侣pG-KJE8在16 ℃条件下可以更好地促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达,且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性,对制备效价高、成本低的牛冠状病毒样颗粒疫苗具有重要意义.
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关键词
牛冠状病毒病毒样颗粒可溶性表达分子伴侣质粒Bovine coronavirus virus-like particlessoluble expressionmolecular chaperone plasmid
分类号
S852.653
栏目名称
发布时间
2025-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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