换一批RNA解旋酶DDX46敲除对新城疫病毒复制和抗病毒免疫的影响
Effect of RNA Helicase Ddx46 Knockout on the Replication of Newcastle Disease Virus and Antiviral Immunity
摘要本研究利用CRISPR-Cas9技术构建DEAD/H-box解旋酶超家族中DDX46敲除细胞,并评估DDX46敲除对新城疫病毒(NDV)复制和抗病毒免疫的影响.首先针对DDX46共设计3条sgRNA,构建重组LentiCRISPRv2-DDX46质粒,包装慢病毒并感染HeLa细胞,使用嘌呤霉素进行筛选,最后进行亚克隆筛选.通过测序以及Western blot验证,结果表明共得到2株杂合子DDX46敲除细胞系.NDV分别感染野生型和DDX46敲除细胞,结果显示NDV复制在DDX46敲除细胞中受到显著抑制,而干扰素β和下游干扰素刺激因子的表达量则显著增加,表明NDV感染细胞后,DDX46显著抑制宿主天然免疫,并促进病毒复制.上述研究为DDX46调控抗病毒先天性免疫的研究奠定了基础.
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