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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价

Construction of Recombinant Lactococcus lactis Expressing Hemagglutinin HA1 of H9N2 Subtype Avian Influenza Virus and Evaluation of its Immune Effect

摘要本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×109CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平.结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升.本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果.

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