换一批禽致病性大肠杆菌QseC蛋白的表达及其免疫原性分析
Expression and Immunogenicity of QseC Protein in Avian Pathogenic Escherichia coli
摘要禽致病性大肠杆菌能够引起禽的大肠杆菌病,对我国养禽业造成严重的经济损失.利用生物信息学方法,分析QseC蛋白的跨膜区域、信号肽、抗原性及亚细胞定位,设计表达引物,以APCE110菌株为模板进行PCR扩增,构建重组表达质粒pCold Ⅰ-QseC并转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中诱导蛋白的表达和纯化,重组蛋白QseC与抗QseC小鼠血清和血清型为O1、O2、O78的APEC康复血清进行Western blot试验,检测其免疫原性和反应原性.用C-ImmSim、ClusPro分别进行免疫模拟和蛋白-Toll样受体的分子对接,验证QseC蛋白的免疫效果和蛋白与Toll样受体分子之间的结合模式.结果显示:QseC蛋白是细菌的胞质跨膜蛋白,其中膜内区共编码183个氨基酸,膜外区共编码208个氨基酸,氨基酸序列中无信号肽,抗原性为0.51;成功构建表达质粒并在上清中表达,经纯化浓度为0.8 mg/mL;Western blot结果显示,QseC能与抗QseC小鼠血清和不同血清型的APEC康复血清产生特异性条带,表明QseC蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;C-ImmSim免疫模拟显示,在3、10、17日龄进行免疫能够诱导宿主机体产生适应性免疫和记忆免疫,并在25日龄左右抗体效价达到最高值;分子对接结果显示,QseC蛋白与TLR2、TLR4和TLR5受体都具有较高的亲和力.本试验成功构建了pCold Ⅰ-QseC表达质粒并纯化获得QseC蛋白,验证其具有良好的免疫原性和反应原性,同时,与TLR2、TLR4和TLR5受体都具有较高的亲和力.本研究结果为APEC亚单位疫苗研发提供参考.
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分类号
S852.61
栏目名称
发布时间
2025-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32172856）
国家自然科学基金（31972654）
上海市自然科学基金（22ZR1476100）
上海市自然科学基金（23ZR1476600）
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2023JB02）
中国农业科学院科技创新工程（SHVRI-ASTIP-2014-8）
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