换一批基于沙门菌转录因子RipR的衣康酸检测方法建立
Development of an Itaconate Detection Method Based On Salmonella Transcription Factor RipR
摘要衣康酸是由巨噬细胞通过炎症刺激促使顺乌头酸脱羧酶生成,衣康酸具有免疫调节、抗氧化、抗炎和杀菌作用,开展衣康酸检测方法研究,是研究其调控作用的关键.沙门菌转录因子RipR(STM3121基因编码)可通过结合STM3121启动子抑制其转录活性,而RipR与衣康酸结合后可解除其抑制作用.基于此调控方式,可将表达绿色荧光蛋白的报告基因AmCyan、STM3121及其启动子3个元件串联后构建衣康酸检测质粒,通过检测AmCyan的转录活性,可实现对衣康酸的定性检测.因此,本研究首先通过重叠PCR技术,将AmCyan、STM3121及其启动子序列克隆至pACYC184质粒中,成功构建衣康酸检测质粒pACYC184-STM3121-AmCyan.其次,为了评价该质粒对衣康酸的检测作用,将其转化DH5α,成功获得DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan衣康酸检测模型菌株.最后,向该模型菌株分别添加外源和内源性(大肠杆菌感染RAW264.7 巨噬细胞后的细胞裂解液)2种方式产生的衣康酸,验证该质粒对衣康酸的检测作用.结果表明,二者均可成功诱导DH5α-pACYC184-STM3121-AmCyan模型菌株产生绿色荧光,而对照组不产生.本研究成功建立衣康酸检测方法,为后续开展衣康酸生物学功能研究提供技术支撑.
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分类号
S852.65
栏目名称
发布时间
2025-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
政府间国际科技创新合作重点项目（2018YFE0102200）
国家自然科学基金（32072829）
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