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基于登革病毒噬菌体展示文库的E蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

Construction and Identification of Serotype 2 Dengue Virus E Antigen-Specific Nanobodies Based on Phage Display Library

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摘要登革病毒(DENV)是一种经伊蚊传播的人兽共患病毒,目前没有特异性抗DENV药物和安全且高效的疫苗.为制备可中和DENV的纳米抗体,本研究构建血清Ⅱ型DENV(DENV-2)特异性噬菌体展示文库,并筛选DENV E蛋白特异性纳米抗体.首先将灭活并浓缩的DENV-2免疫羊驼,采血分离外周血单核细胞(PBMC)并提取总RNA,通过RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)并克隆入pCANTAB-5E质粒,构建成DENV特异性纳米抗体噬菌体展示文库,然后,以DENV-2 E蛋白为抗原淘筛纳米抗体库,将筛选到的2个VHH片段克隆入pPICZαA载体后在毕赤酵母(GS115株)中表达,并纯化抗体,最后,鉴定纯化的纳米抗体与E蛋白的反应性.结果显示:成功构建库容为9.1×108个的噬菌体展示文库;经3轮淘筛获得1株与DENV-2 E蛋白特异结合的纳米抗体DV2-Nb2.本研究为DENV诊断和抗体药物研发提供实验技术基础.

作者陈玲玲 ^[1] 范瑞文 ^[2] 何雷 ^[3] 贾琼 ^[2] 秦蓉芬 ^[2] 陈玉红 ^[3] 李雷斌 ^[3] 黄袁慧 ^[3] 刘玉良 ^[4] 李义平 ^[5] 王传彬 ^[4] 学术成果认领

作者单位广西大学动物科学技术学院,南宁 530004;中国动物疫病预防控制中心,北京 102600 ^[1] 山西农业大学动物医学学院,太谷 030801 ^[2] 广西大学动物科学技术学院,南宁 530004 ^[3] 中国动物疫病预防控制中心,北京 102600 ^[4] 中山大学中山医学院热带病防治研究教育部重点实验室,广州 510080 ^[5]

关键词血清Ⅱ型登革病毒 E蛋白纳米抗体噬菌体展示 Dengue virus serotype 2 E protein nanobody phage display technology

分类号 R392（医学免疫学）

栏目名称

研究论文

发布时间 2025-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

中山大学热带病防治研究教育部重点实验室开放基金