摘要为了制备猫冠状病毒(Feline Coronavirus,FCoV)N蛋白单克隆抗体,构建了重组质粒pClod-sumo-N.将重组质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,诱导表达重组蛋白.SDS-PAGE结果显示,在16℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导24 h条件下,获得了约70 kDa的可溶性重组N蛋白.Western blot分析证实,该重组蛋白能与标签His抗体发生反应.重组蛋白用镍离子金属亲和层析柱纯化后,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选和亚克隆,获得了1株能稳定分泌N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3E6B7).Western blot与IFA结果显示,获得的单克隆抗体能与猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)发生特异性反应.本研究获得的单克隆抗体为FCoV N蛋白的结构和功能研究以及诊断方法的建立提供了良好的工具.
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