换一批甲状旁腺功能低下症基因治疗中重组表达体系pCKM-mPTH质粒的构建与表达
Construction and expression of Pckm-Mpth recombinant plasmid in gene therapy of hypoparathyroidism
摘要目的研究构建重组表达体系pCKM-mPTH质粒,寻找甲状旁腺功能低下症的基因治疗途径. 方法采用重叠聚合酶链反应(PCR)法、巢式PCR法及粘端连接法构建pCKM-mPTH质粒,以脂质体转染骨骼肌细胞,用β-actin半定量和放免法分别测定其在细胞内外的表达. 结果嵌合基因 pCKM-mPTH质粒测序完全符合已知核苷酸序列,并完成定点突变,转染骨骼肌细胞后,β-actin半定量法测得mPTH在细胞内成功高效表达,放免法测得24h克隆细胞培养液中甲状旁腺激素蛋白的含量为26.37ng/L. 结论成功构建了SD(Sprague Dawley)大鼠重组基因表达体系pCKM-mPTH质粒,并证实其在骨骼肌细胞中有高效表达.
更多相关知识
医学主题词
甲状旁腺(Parathyroid Glands)基因治疗(Genetic Therapy)质粒(Plasmids)基因(Genes)肌纤维, 骨骼(Muscle Fibers, Skeletal)
分类号
R6（外科学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1005-2208.2003.11.015
发布时间
2004-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39970726）
- 浏览0
- 被引7
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
