换一批绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd-缺失株平衡致死载体系统中的表达
GFP expression in asd- mutant host-vector balanced lethal system of Salmonella choleraesuis C500 strain
摘要猪霍乱沙门氏茵C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好.为将猪霍乱沙门氏茵开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本茵,用负向选择的重组自杀性质粒介导接舍转移的方法构建了无抗性标记的asd(-)缺失株.首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408 bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接舍转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定.该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP.PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达栽体pYA3493中,电转化C500asd(-)缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光.上述结果表明,该asd(-)缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础.
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分类号
S852.61
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-4545.2007.04.016
发布时间
2007-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30571386）
教育部留学回国人员科研启动基金（2006AA205A02）
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