换一批表达狂犬病病毒糖蛋白稳转细胞株的构建与应用
Construction and application of cell line stably expressing glycoprotein of rabies virus
摘要旨在利用Piggy Bac转座子系统构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)糖蛋白(glycoprotein,G)的稳转细胞株,为复制缺陷型RABV的拯救与培养奠定基础.根据NCBI公布的RABV SRV9株G基因序列设计引物,利用PCR技术扩增RABV-G基因并将其克隆至真核表达载体YHM-spCas9,构建重组质粒YHM-SRV9-G.将重组质粒与Piggy Bac转座子酶辅助质粒共转染BSR细胞,利用20 mg/L灭瘟素S盐酸盐(blasticidin)连续筛选2周后获得有抗性的细胞簇.利用有限稀释法连续2次单克隆纯化后获得稳定表达RABV-G蛋白的单克隆细胞株BSR-G.PCR、间接免疫荧光及Western blot鉴定结果显示,BSR-G细胞携带RABV-G基因并可表达G蛋白,激光共聚焦结果显示RABV-G蛋白定位在细胞膜.将缺失G基因的重组狂犬病病毒(rSRV9-△G-eGFP)分别感染BSR和BSR-G细胞,发现rSRV9-△G-eGFP可在BSR-G细胞中增殖.本研究成功构建了稳定表达RABV-G蛋白的稳转细胞株BSR-G,为狂犬病复制缺陷型基因工程疫苗的研制奠定了基础.
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关键词
狂犬病病毒糖蛋白稳转细胞株复制缺陷病毒rabies virusglycoproteinstable-transfection cell linereplication-deficient virus
栏目名称
DOI
10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.05.18
发布时间
2023-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划资助项目（20200402048NC）
国家自然科学基金（31872487）
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