蛋白酶活化受体1与4在血小板活化中的作用机制

Mechanism of Action of Protease-Activated Receptors 1 and 4 in Platelet Activation

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摘要为了比较蛋白酶活化受体1和4(PAR1, PAR4)合成肽对血小板膜表面糖蛋白GPIbα表达及细胞骨架的影响,揭示蛋白酶活化受体在血小板信号传递中的作用,选择25 μmol/L PAR1与250 μmol/L PAR4两类合成肽分别在不同时间段(0-60分钟)活化血小板,应用流式细胞仪测定血小板膜糖蛋白GPIbα及P-选择蛋白的表达,并结合SDS-PAGE与转移电泳技术比较血小板活化前后细胞骨架GPIbα、肌动蛋白、肌球蛋白的变化,同时对膜骨架成分进行GPIbα免疫沉淀分析. 结果显示,PAR1与PAR4两类合成肽均可促使血小板活化,其P-选择蛋白水平显著升高,GPIbα表达进行性减少又出现逐渐回升的可逆性变化,各时间段引起的GPIbα改变在两者之间都具有显著差异(P<0.05) ,其中PAR1首先发生作用,但PAR4维持时间更长.细胞骨架蛋白分析显示肌动蛋白与肌球蛋白协同GPIbα呈现先增加后减少的动态变化.免疫印迹也表明与GPIbα相连的肌动蛋白及肌球蛋白出现可逆性改变.结论: PAR1与PAR4在血小板信号传递过程中发挥了重要作用,它们能各自独立地介导血小板活化,并导致GPIbα逆转,这与细胞骨架的积极参与相关.PAR1起效较快,PAR4维持作用更长久.