换一批
换一批摘要近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs.虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点.但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用.本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送BmihRNAs系统,设计靶向人Bmi-1的载体.以pAdTrack CMV质粒为模板扩增CMV-GFP表达盒,从pGEIBMIhRNA质粒上酶切下U6-BMI-1 shRNA表达盒,克隆它们入穿梭质粒pShuttle中,然后与pAdEasy-1质粒基因重组产生腺病毒质粒pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,转染293A包装细胞,收获病毒.病毒感染K562细胞后,在mRNA和蛋白水平上分别用Real Time-PCR和Westem blot检测BMI的表达水平.结果表明:成功构建了pGEIBMIhRNA腺病毒质粒并有效包装出病毒.感染BmihRNA腺病毒的K562细胞在mRNA和蛋白水平上均显著下调了Bmi-1的表达,而时照病毒没有明显的效果.结论:腺病毒是一种有效递送siRNA入哺乳动物细胞的载体.腺病毒递送siRNA载体可能成为siRNA药物的基因治疗载体.
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2009-11-30
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