换一批
换一批摘要本研究探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默人红白细胞白血病细胞(HEL)的evi1基因后对细胞evi1基因表达的抑制作用及细胞生物学特征变化及其作用机制.体外合成3条evi1基因特异性的siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)并转染HEL细胞,并设对照.用四甲基偶氮唑蓝法评价细胞增殖抑制情况,半定量逆转录聚合酶链反应(semiquantitative RT-PCR)检测evi1基因mRNA的表达,台盼蓝染色试验测定细胞活性的变化,流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率.结果显示,细胞转染24、48、72小时后,以siRNA-1作用最强,转染后48小时抑制作用最明显.siRNA浓度为120 nmol/L时,抑制率达到最大.转染48小时后siRNA-1对HEL细胞的增殖抑制率为(72.22±2.80)%,evi1-mRNA相对表达率为(27.31±1.11)%,HEL细胞活率为(26.05±2.49)%,与其他各组相比有显著性差异(p＜0.001).siRNA可使细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,凋亡率明显增高(p＜0.01).结论:evi1基因特异性siRNA可抑制HEL细胞增殖,使evi1-mRNA表达水平降低,细胞活性下降,HEL细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞的有丝分裂,促进细胞凋亡.
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