换一批
换一批摘要本研究探讨mll-af4融合基因的表观遗传学调控机制,以筛选靶向调控m11-af4融合基因的microRNA.利用Targetscan在线分析软件预测特异性靶向mll-af4基因3'端非翻译区域(3'-untranslated region,3'UTR)的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增mll-af4基因3'UTR序列,插入经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切的荧光素酶报告栽体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.miR-142-3p mimics以脂质体Hiperfect转染至RS4;11细胞,选用实时定量PCR及Western blot检测mll-af4 mRNA及蛋白的表达.结果表明,成功构建了含有1 935 bp、2 104 bp和1 371 bp的mll-af4基因3'UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-AF4-3'UTR,并通过酶切及基因测序方法鉴定得到证实.荧光素酶报告实验提示,miR-142组荧光素酶活性明显低于对照组.RS4;11细胞中过表达miR-142-3p可以明显下调MLL-AF4融合蛋白及mRNA表达.结论:miR-142-3p通过靶向结合mll-af4基因3'UTR的结合位点特异调控mll-af4基因表达.
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