小鼠MYSM1基因稳定敲除的间充质干细胞系C3H10T 1/2的建立及其体外免疫调节作用

Establishment of mouse stably knockout of MYSM1 in MSC cell line C3H10T1/2 and its effect on the immune regulation in vitro

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摘要目的:本研究旨在构建小鼠组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1基因敲除的间充质干细胞系(mesenchymal stem cells,MSC),并初步探讨MYSM1基因敲除后MSC免疫学特性的变化.方法:通过CRISPR-Cas9技术对小鼠间充质干细胞系(C3H10T 1/2) MYSM1基因进行特异性基因敲除,再采用流式细胞术、定量PCR和蛋白印迹(Western blot)技术检测基因敲除情况.为检测MYSM1敲除对MSC免疫调节能力的影响,将MYSM1基因敲除的MSC上清加入脾脏淋巴细胞培养体系中,在镜下观察其对淋巴细胞增殖的调节作用,并进一步采用定量PCR检测淋巴细胞内炎性因子白介素4,干扰素γ、白介素17A和Foxp3的表达情况.结果:流式细胞术、定量PCR及Westernblot的鉴定结果表明,CRISPR-Cas9技术稳定敲除了MSC细胞系内MYSM1基因.敲除了MYSM1基因之后的MSC上清显著抑制刀豆蛋白A诱导的淋巴细胞增殖及炎性因子分泌(P＜0.05).结论:本研究成功地构建了小鼠MYSM1稳定敲除的间充质干细胞系,同时发现MYSM1敲除后MSC体外免疫抑制作用增强,此相关发现为深入研究MYSM1基因的功能,探索基因修饰MSC对免疫相关性疾病的治疗奠定了基础.

作者刘宇 ^[1] 朱恒 ^[2] 江小霞 ^[2] 张斌 ^[3] 廖丽 ^[4] 刘元林 ^[2] 张毅 ^[2] 陈虎 ^[3] 毛宁 ^[2] 学术成果认领

作者单位军事医学科学院附属医院造血干细胞移植科,北京100071;全军造血干细胞研究所,北京100071;军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室,北京100850 ^[1] 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室,北京,100850 ^[2] 军事医学科学院附属医院造血干细胞移植科,北京100071;全军造血干细胞研究所,北京100071 ^[3] 全军造血干细胞研究所,北京,100071 ^[4]

关键词组蛋白H2A去泛素化酶MYSM1 间充质干细胞 CRISPR-Cas9 基因敲除 histone H2A deubiquitinase MYSM1 mesenchymal stem cell CRISPR-Cas9 gene knockout

主题词基因(Genes)间质干细胞(Mesenchymal Stem Cells)小鼠(Mice)蛋白(Egg White)免疫调节(Immunomodulation)

分类号 R329.28 Q253

栏目名称 间充质干细胞生物学

DOI 10.7534/j.issn.1009-2137.2017.02.043

发布时间 2017-05-22

基金项目

国家自然科学基金面上项目 北京市自然科学基金面上项目