非连续密度梯度离心法分离红细胞的影响因素研究

Affected Factors of Separating Erythrocytes by Discontinuous of Density Gradient Centrifugation

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摘要目的:研究非连续密度梯度分离法分离红细胞的影响因素,初步建立Percoll分离液在红细胞分离中的最佳操作条件.方法:检测Percoll与1.5 mol/L NaC1比例为9∶1、10∶1、11∶1、12∶1、13∶1渗透压情况,选取等渗比例作为最佳母液(SIP);以不同密度细胞被充分离心沉降分离,较少存在红细胞滞留、拖带现象作为分离效果评判标准,比较不同红细胞悬液浓度、不同离心力、不同离心加减速度、不同温度和不同离心时间的分离效果.结果:50％以下浓度红细胞悬液分离效果优于50％以上浓度红细胞悬液,4 000 ×g优于3 000和2 000 ×g的离心效果,2-8的离心加减速度可以获得满意的离心效果,4℃分层效果比室温稳定,20 min优于15和10 min的分离效果.结论:Percoll与1.5 mol/L NaC1为12∶1和11∶1的母液可作为等渗母液,优先4℃离心条件离心,加减速度2-8,其离心效果会随着红细胞悬液浓度的降低、离心时间的延长、离心力的增加而获得更好的分离效果.