换一批U2AF1基因突变调控FOX03a-Bim信号通路对SKM-1细胞炎症因子表达的影响
Effect of U2AF1 Mutation to Inflammatory Cytokine Expression in SKM-1 Cells through FOXO3a-Bim Signaling Pathway
摘要目的:探讨U2AF1基因突变对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞炎症因子表达的影响,并观察上述作用是否通过FOXO3a-Bim信号通路介导.方法:构建U2AF1野生型以及U2AF1蛋白序列第34位丝氨酸突变为苯丙氨酸的真核表达质粒(S34F),慢病毒包装并转染SKM-1细胞,通过慢病毒技术上调细胞中FOXO3a的表达并验证其转染效率.采用CCK-8法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;qRT-PCR法检测促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α,以及抑炎因子IL-4的表达;Western blot法检测FOXO3a、Bim、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.结果:与对照组相比,S34F组细胞凋亡率及促炎因子IL-1β和TNF-α转录水平显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞在G2期,细胞增殖及抑炎因子IL-.4的转录水平显著降低;FOXO3a、Bim和Bax蛋白表达水平显著增加(P＜0.05);Bcl-2表达水平显著降低(P＜0.05).FOXO3a基因的上调使U2AF1基因S34F突变的SKM-1细胞增殖受到明显抑制、细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在S期和G2期;促炎因子IL-1β和TNF-α转录水平显著降低(P＜0.05),抑炎因子IL-4转录水平无明显变化(P＞0.05).结论:U2AF1基因S34F突变可诱导SKM-1细胞炎症反应表型,并通过FOXO3a-Bim信号通路在MDS中发挥作用.
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