SPARC过表达通过调控CPBP/MLKL增强SKM-1细胞对Ara-C的敏感性
SPARC Overexpression Enhances the Sensitivity of SKM-1 Cells to Ara-C by Regulating CPBP/MLKL
摘要目的:探讨SPARC基因过表达对AML-MDS细胞株SKM-1阿糖胞苷(Ara-C)化疗敏感性的影响及调控机制.方法:该实验分为正常SKM-1细胞(对照)、空载(LV-NC)、SPARC过表达(LV-SPARC)、SKM-1细胞+30 ng/ml Ara-C(30 ng/ml Ara-C)、LV-NC+30 ng/ml Ara-C 和 LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C 共 6 组.采用 CCK-8 法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,RT-qPCR检测各组细胞SPARC、CPBP和MLKL的mRNA表达水平,Western blot检测相关蛋白表达水平.结果:SPARC过表达和Ara-C共处理后,细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显增高,BCL-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达水平显著增高(P<0.05).与对照组相比,LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C组的细胞周期明显阻滞于S期,CDK2表达水平显著降低,p27KIP1表达水平明显增高(P<0.05).与LV-SPARC组和30 ng/ml Ara-C 组相比,LV-SPARC+30 ng/ml Ara-C 组的 CPBP 和 MLKL(p-MLKL)的 mRNA 和蛋白表达水平明显增高(P<0.05).SPARC过表达和Ara-C共处理后,p-AKT蛋白表达水平降低,p53蛋白表达水平增高(P<0.05).结论:SPARC过表达增强了 SKM-1细胞对Ara-C的敏感性,促进了细胞周期阻滞和细胞凋亡能力,其机制可能与调控CPBP/MLKL途径相关.
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