摘要目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据.方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化.ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子Ⅷ(FⅧ)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量.多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况.将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域.结果:在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF.ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力.ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似,提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解.裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区(Cys-rich,CysR)结构域和间隔区结构域,但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列(TSP1 2-8)和2个补体结合区(CUB)结构域.结论:内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感,这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解,并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理.