换一批急性B淋巴细胞白血病BCL-2抑制剂耐药细胞系的构建及耐药机制研究
Establishment of BCL-2 Inhibitors-Resistant B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cell Lines and Study on Their Resistance Mechanisms
摘要目的:利用急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞系RS4;11构建对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系,并探讨其可能的耐药机制.方法:采用BCL-2抑制剂navitoclax和venetoclax小剂量低浓度递增的方法间歇诱导RS4;11细胞系,构建RS4;11/Nav和RS4;11/Ven耐药细胞系,通过MTT法检测不同药物浓度下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,转录组测序技术(RNA-seq)检测RS4;11耐药细胞系和亲本细胞系中的差异表达基因(DEGs),RT-PCR检测耐药细胞系与亲本细胞系中差异表达基因的mRNA表达水平,Western blot检测耐药细胞系和亲本细胞系中BCL-2家族抗凋亡蛋白的表达水平.结果:成功构建了对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系RS4;11/Nav和RS4;11/Ven,RS4;11/Nav 对 navitoclax 的耐药指数为 328.655±47.377,RS4;11/Ven 对 venetoclax 的耐药指数为 2 894.027±300.311.流式细胞术检测细胞凋亡发现,相比耐药细胞系,RS4;11亲本细胞系明显被BCL-2抑制剂抑制,而耐药细胞系的凋亡率基本未受药物的影响.Western blot检测结果表明,BCL-2家族抗凋亡蛋白在耐药细胞系中的表达无明显增多.RNA-seq、RT-PCR和Western blot检测发现EP300在耐药细胞系中的表达较亲本细胞系明显增高(P＜0.05).结论:小剂量低浓度递增间歇诱导法可成功构建对BCL-2抑制剂耐药的B-ALL细胞系,并且其耐药机制可能与EP300的表达上调有关.
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关键词
急性B淋巴细胞白血病BCL-2抑制剂耐药细胞系RNA-seqEP300B-cell acute lymphoblastic leukemiaBCL-2 inhibitorsdrug-resistant cell lineRNA-seqEP300
分类号
R733.71
栏目名称
DOI
10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2024.05.001
发布时间
2024-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2019YFA0110803）；
国家自然科学基金（81900135）；
国家自然科学基金（82270189）；
国家自然科学基金（81890992）；
中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研项目（2018RC310019）；
中国医学科学院临床与转化医学研究专项（2022-I2M-C&T-B-088）
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