换一批敲除ATG5、ATG7基因对RPMI-8226细胞铁死亡敏感性的影响
Effects of ATG5 and ATG7 Knockout on Ferroptosis Sensitivity of RPMI-8226 Cells
摘要目的:探讨ATG5、ATG7基因对诱导多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226细胞发生铁死亡的敏感性的影响.方法:用CRISPR/Cas9技术敲除RPMI-8226细胞株中自噬关键基因ATG5和ATG7;Western blot法鉴定基因敲除细胞并检测自噬相关蛋白P62、LC3B的表达变化;流式细胞术检测基因敲除细胞对RSL3敏感性的变化;检测基因敲除细胞内亚铁离子含量和活性氧水平.结果:Western blot检测结果证实RPMI-8226细胞中ATG5、ATG7基因被成功敲除.流式细胞术检测结果显示,RPMI-8226细胞存活率与不同浓度RSL3呈剂量依赖关系(r=-0.969);用10 μmol/L的RSL3诱导对照组和基因敲除组细胞发生铁死亡,48 h后基因敲除组细胞存活率显著高于对照组(均P＜0.001).ATG5、ATG7基因敲除后,细胞内Fe2+的含量较对照组明显下降(均P＜0.01),活性氧水平亦明显下降(均P＜0.001).结论:敲除ATG5、ATG7基因可以抑制多发性骨髓瘤细胞发生铁死亡,LAP途径可能参与其调控.
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关键词
铁死亡ATG5ATG7LC3相关吞噬作用活性氧ferroptosisATG5 geneATG7 geneLC3-associated phagocytosisreactive oxygen species
栏目名称
DOI
10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2024.05.022
发布时间
2024-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81770223）
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