换一批具有抗氧化能力的人脐带间充质干细胞制备及评价策略研究
Generation and Evaluation of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stem Cells with Antioxidant Capacity
摘要目的:从人脐带中分离制备一种具有抗氧化能力的间充质干细胞(antioxidant mesenchymal stem cell,AO-MSC)并评价其细胞生物学特性.方法:采用无血清培养体系,结合胶原酶消化培养法以及胶原酶消化组织块培养法,从人脐带华通氏胶组织分离培养MSC.使用0.2％Ⅱ型胶原酶消化,未完全消化的组织块贴壁培养收获AO-MSC.以常规消化培养法为对照.成纤维细胞集落形成实验检测MSC集落形成能力;CCK-8检测MSC增殖能力;流式细胞术及免疫荧光染色检测MSC表面标志物;体外诱导分化评价MSC成脂成骨能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨和成脂关键转录因子的表达差异;RT-qPCR检测MSC抗氧化还原物质SOD-1、GSH、GAT、NQO1的表达情况.结果:本策略分离的AO-MSC在18 d汇合率为80％-90％,细胞呈漩涡状生长.流式细胞术及免疫荧光染色检测结果显示,AO-MSC高表达CD73、CD29、CD105、CD90,低表达CD31、CD45、HLA-DR;胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC自我更新及分化能力强于对照组MSC;对照组MSC体外成脂成骨能力强于胶原酶消化组织块培养法所得AO-MSC;RT-qPCR检测结果显示,胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC其表达的抗氧化还原物质水平高于对照组.结论:成功制备了基于无血清体系的具备抗氧化能力的人脐带MSC.
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关键词
脐带间充质干细胞华通氏胶无血清培养体系胶原酶消化组织块培养法抗氧化umbilical cord mesenchymal stem cellsWharton's jellyserum-free culture systemcollagenase-digested tissue debris culture protocolantioxidant
栏目名称
DOI
10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2024.06.039
发布时间
2024-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家干细胞重点研发专项（2022YFA1103500）
国家干细胞重点研发专项（2022YFA1104100）
国家自然科学基金（82172388）
国家自然科学基金（82372373）
国家自然科学基金（81871771）
国家自然科学基金（81500083）
国家自然科学基金（81572159）
北京自然科学基金（7192203）
北京自然科学基金（7182123）
北京自然科学基金（L212065）
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