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敲除DNMT1增强NK细胞对急性髓细胞白血病的抑制作用

Knocking Out DNMT1 Enhances the Inhibitory Effect of NK Cells on Acute Myeloid Leukemia

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摘要目的:探讨敲除DNA甲基转移酶1(DNMT1)对NK细胞抑制急性髓系白血病(AML)的影响及机制.方法:收集AML患者、对照人群外周血NK细胞,PCR测定DNMT1 mRNA水平,Western blot测定DNMT1蛋白水平.构建DNMT1敲除小鼠,获取NKDNMT1-/-细胞;以白介素-12、15、18刺激NK细胞以构建记忆性NK细胞,ELISA法测定γ干扰素(IFN-γ)水平.将记忆性NK细胞与HL60细胞共培养,LDH法检测NKDNMT1-/-细胞对HL60细胞的杀伤作用,流式细胞术检测HL60细胞凋亡及NK细胞NKG2D水平,Western blot测定NK细胞穿孔素、颗粒酶B蛋白水平.通过尾静脉注射HL60细胞构建AML模型小鼠,同时注射记忆性NK细胞,检测小鼠体重、CD33阳性率及生存时间.结果:AML患者外周血NK细胞DNMT1 mRNA、蛋白水平均明显高于对照组(均P＜0.01),经白介素刺激后IFN-γ水平明显低于对照组(P＜0.05).与NKDNMT1+/+细胞比较,NKDNMT1-/-细胞经白介素刺激后IFN-γ分泌能力明显升高(P＜0.05).NKDNMT1-/-细胞对HL60细胞杀伤、凋亡诱导作用明显强于NKDNMT1+/+细胞(均P＜0.05).NKDNMT1-/-细胞的NKG2D水平及表达穿孔素、颗粒酶B能力明显高于NKDNMT1+/+细胞(均P＜0.05).与注射NKDNMT1+/+细胞的AML小鼠相比较,注射NKDNMT1-/-细胞的AML小鼠体重明显增加,CD33阳性率明显下降,生存时间明显延长(均P＜0.05).结论:敲除DNMT1可增强NK细胞对AML的抑制作用,其机制可能与增强NK细胞记忆功能相关.