不同制备条件对去白细胞悬浮红细胞质量的影响
The impact of different preparation conditions on the quality of leukocyte-depleted suspended red blood cells
摘要目的 研究不同垂直高度差过滤血液、血液表面温度、离心力、离心时间、储存介质等条件对制备去白细胞悬浮红细胞质量的影响.方法 采用随机抽样法选取 480 袋 400 ml全血作为研究对象,分别用于白细胞去除、离心以及分离.去除白细胞环节选取 60 袋当天采集且血液温度为 18℃的全血,血液过滤垂直高度差分别为 1.2 m组、1.5 m组、1.8 m组,每组 20 袋;另选取 60 袋当天采集的全血,根据血液表面温度分为高温组(>20℃)、中温组(15~20℃)、低温组(<15℃),每组 20 袋;在相同垂直高度差下进行去白细胞过滤,对比三组的过滤时间并采用流式法检测白细胞残留量.离心环节选取 320 袋当天采集并过滤的去白细胞全血按照 16 种不同离心条件进行离心,对比制备后去白细胞悬浮红细胞容量、血红蛋白含量以及溶血率.分离环节选取 40 袋当天采集并过滤的去白细胞全血于当天完成分离制备,保存去白细胞全血样本与去白细胞悬浮红细胞样本,分别于 0、5、7、14、28 d检测储存于血浆和红细胞添加液中红细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量以及上清液中 2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)释放含量,对比同源红细胞储存在血浆与红细胞添加液中对ATP与 2,3-DPG释放含量的影响.结果 ①不同垂直高度差条件下,血液表面温度为 18℃的全血,去除白细胞后 1.2 m组白细胞残留量(2.29±1.34)×106/L显著低于 1.5 m组的(3.74±1.66)×106/L和 1.8 m组的(4.45±2.26)×106/L,差异有统计学意义(P<0.05);三组在过滤时间上差异无统计学意义(P>0.05).不同滤前血液表面温度条件下,低温组的白细胞残留量(1.50±1.23)×106/L低于中温组的(2.14±0.54)×106/L和高温组的(2.71±1.95)×106/L,差异有统计学意义(P<0.05);三组在过滤时间上差异无统计学意义(P>0.05).②不同离心力和离心时间条件下:随着离心力的增大与离心时间的延长,去白细胞悬浮红细胞容量、血红蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05).随着离心力的增大与离心时间的延长,溶血率呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05);且离心力对溶血率的影响较离心时间更大.③不同储存介质条件下,红细胞内ATP含量 0 d时接近相同,3 d时差异初显,随着储存时间的延长ATP含量差异逐渐增大,28 d储存于血浆中红细胞内ATP含量减少约 48%.而储存于红细胞添加液中红细胞内ATP含量仅减少 20%,减少速度明显少于全血样本;2,3-DPG释放含量储存于红细胞添加液中在 0~7 d时趋于稳定,7 d后 2,3-DPG释放含量开始增加;而储存于血浆中在 3 d时 2,3-DPG释放含量较 0 d增加明显,随着储存时间的延长红细胞释放到上清液中 2,3-DPG含量逐渐增多.储存在红细胞添加液内的 2,3-DPG释放含量明显少于全血.结论 垂直高度差和血液表面温度均对白细胞残留量有显著影响,建议将垂直高度差控制在1.2 m,并将滤前血液表面温度控制在 20℃以下.随着离心时间与离心力的增加,去白细胞悬浮红细胞溶血率明显增加.相较于离心时间,离心力对溶血率的影响更加明显.制备过程中,可根据制备需要选择更佳的离心方式,离心力大、离心时间短可以节省制备时间,而离心力小、离心时间长对于红细胞"更温和",可根据制备需要选择适合的离心参数.研究表明在制备红细胞制剂时,当离心力为 5000 g,则离心时间不宜超过 7 min.如 4000 g/15 min、4500 g/12 min、4500 g/15 min、5000 g/7 min等更为适合.红细胞储存在不同介质中会影响红细胞内ATP与红细胞释放到储存介质的 2,3-DPG释放含量,3d时二者差异初显,3 d后差异开始明显,建议在3 d内完成去白细胞全血的分离并制备成去白细胞悬浮红细胞.
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