换一批摘要目的 建立重组酶聚合酶扩增技术(RPA)联合原核生物 Argonaute(PfAgo)(RPA-PfAgo)蛋白对沙门氏菌进行实时荧光快速检测,评估其检测效果.方法 使用沙门氏菌侵袭蛋白 A(invA)基因作为目的基因,对其进行引物设计和筛选,筛选出最佳引物用于 RPA 扩增反应;同时设计筛选出引导 PfAgo蛋白切割目标 DNA 的最佳引导序列(gDNA)以及 P 探针,在 95℃的条件下,使用 SLAN-96S Time 聚合酶链式反应(PCR)检测系统进行实时荧光检测.结果 使用金黄色葡萄球菌菌株等 17 种临床典型致病菌进行特异性检测,在恒温的情况下 1.5 h 只有沙门氏菌的菌株出现了荧光信号,其他菌株均未出现荧光信号,并且未出现交叉反应,即 RPA-PfAgo 蛋白快速检测的方法特异性较高.将沙门氏菌培养物进行稀释,稀释浓度为 1.05×1010 至 1 CFU/ml,使用RPA-PfAgo 蛋白进行检测,发现RPA-PfAgo 蛋白对沙门氏菌的检测敏感性为 1.05×10 CFU/ml,即最低限的稀释倍数,相比于常规培养法的检测敏感性更高.该检测方法的特异性和敏感性较高,均能满足临床检测要求.结论 本研究建立的 RPA-PfAgo 蛋白对沙门氏菌实时荧光检测方法只需恒温扩增,不需要严格控制温度以及复杂昂贵的仪器,具有快速检测、成本较低、特异性强以及敏感性高的优点,相对于传统培养法仅需很短的时间即可检测沙门氏菌的存在与否,能够很好满足临床检测需要.
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栏目名称
DOI
10.14163/j.cnki.11-5547/r.2026.10.046
发布时间
2026-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省潮州市卫生健康局科研项目（2023018）
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