换一批高分辨率熔解曲线法检测CBS基因SNP的技术优化
The Optimization of High Resolution Melting Analysis for SNP of CBS Gene Detection
摘要目的：探索高分辨率熔解曲线法（high resolution melting ，HRM）检测胱硫醚β-合酶（CBS）基因 SNP位点所需的最佳反应体系和条件，建立快速高效的对CBS基因分型的方法。方法通过普通 PCR初步确立引物的退火温度范围，在实时荧光定量PCR（qPCR）-HRM反应中调整确定最佳退火温度。对影响 qPCR-HRM的因素包括反应程序、模板DNA、MgCl2再分别进行优化，确立最佳反应体系和反应条件，对在此基础上得出的基因分型结果通过测序验证其准确性，从而建立系统的 HRM检测CBS基因SNP的方法。结果 HRM检测CBS基因该片段最佳退火温度为62℃，qPCR-HRM最佳反应体系为20μl，引物浓度为0．2μmol/L，Mg2＋为2．5μmol/L，模板DNA为60 ng。在优化的体系条件下筛选出的突变型样本经测序验证与实验结果一致。结论 HRM可以作为检测 SNP准确、经济、高效的方法。
更多相关知识
医学主题词
基因(Genes)胱硫醚(Cystathionine)多态性, 单核苷酸(Polymorphism, Single Nucleotide)方法(Methods)温度(Temperature)
分类号
R446.7（诊断学）
栏目名称
发布时间
2014-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山东省自然科学基金（ZR2011HM018）
山东省大学生学术课题（13CER013）
- 浏览159
- 被引1
- 下载31
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
