绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达

Construction of a SOX9 gene recombinant lentivirus vector marked by green fluorescent protein and it’s expression in rab-bit bone marrow derived mesenchymal stem cells

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摘要目的：构建绿色荧光蛋白标记的 SOX9基因慢病毒载体，转染兔骨髓间充质干细胞，观察 SOX9基因的表达情况。方法双酶切从 GeneArt提供的含 SOX9基因序列的质粒13ABIV6C＿1366933并克隆到 pLenti6．3＿MCS＿IRES2-EGFP载体，获得含 SOX9基因的质粒 pLMIG-13GS0345-1，通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体（Lenti-SOX9-GFP），将Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后观察SOX9基因的表达情况。结果测序结果显示质粒 pLMIG-13GS0345-1中的插入序列与基因库中 SOX9（NM＿000346）基因序列完全一致，成功构建 Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体。Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后可观察到绿色荧光蛋白的表达，RT-PCR与 Western Blot检测结果证明 Lenti-SOX9-GFP转染目的细胞后可在 mRNA及蛋白水平成功表达SOX9。结论本实验成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带 SOX9基因的 Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体，并在兔骨髓间充质干细胞中成功表达，为下一步研究提供前期实验基础。