换一批
换一批AEG-1肺归巢域与Flagellin融合基因的杆状病毒制备及鉴定
Preparation and characterization of the baculovirus containing AEG-1 lung homing domain and Flagellin fusion gene
摘要目的 通过重叠PCR方法获得AEG-1C-Flic融合基因,采用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统获得重组AEG-1C-Flic杆状病毒,为后续AEG-1C-Flic病毒样颗粒疫苗的制备奠定基础.方法从鼠伤寒沙门菌的基因组中PCR扩增细菌鞭毛蛋白Flagellin,采用重叠PCR的方法将AEG1肺归巢域段基因与Flagellin融合,并添加猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白gp41信号肽与跨膜区,构建AEG-1C-Flic pFastBacTM重组表达载体,转座大肠杆菌E.coliDH10Bac感受态细胞后获得重组杆粒,重组杆粒转染昆虫细胞Tn5,获得AEG-1C-Flic重组杆状病毒,并采用Western Blot方法对该病毒进行鉴定.结果构建的AEG-1C-Flic杆状病毒表达载体经双酶切及测序正确,通过转化E.coli DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid,经PCR鉴定大小正确,Western Blot结果显示Bacmid转染Tn5细胞后成功获得重组杆状病毒rBv AEG-1C-Flic.结论成功构建的AEG-1C-Flic杆状病毒可用于新型AEG1-病毒样颗粒疫苗的制备.
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分类号
Q784
栏目名称
实验研究
DOI
10.3969/j.issn.1007-4287.2018.10.047
发布时间
2018-11-15
基金项目
国家自然科学基金资助项目
陕西省科技创新项目
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