换一批下调Tetraspanin 8抑制三阴乳腺癌细胞PD-L1表达增强抗肿瘤免疫反应
Tetraspanin 8 induces PD-L1 expression mediated immune suppression in triple negative breast cancer
摘要目的 探讨TSPAN8表达对抗肿瘤免疫应答的影响及其可能机制.方法 通过CCLE(Cancer Cell Line Encyclopedia)数据库找到Tetraspanin 8(TSPAN8)高表达的人三阴乳腺癌细胞MDA-MB 231.构建siR-TSPAN8质粒并转染MDA-MB 231细胞,以空载体转染组作为对照组,首先使用qRT-PCR(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction)及Western blotting方法比较对照组及siR-TSPAN8组TSPAN8的表达水平.从健康志愿者外周血提取单个核细胞(PBMC)并分别与对照组及siR-TSPAN8组细胞进行共培养.使用CCK-8法比较24 h,48 h,72 h在不同效靶比(E/T)的条件下PBMC对肿瘤细胞的杀伤水平.流式细胞仪检测PBMC中CD3+T细胞、NK细胞及NKT细胞百分比;检测肿瘤细胞表面程序性死亡配体1(PD-L1)的表达水平.结果 通过CCLE数据库发现多株人乳腺癌细胞高表达TSPAN8,选用人三阴乳腺癌细胞MDA-MB 231细胞进行后续转染实验.与对照组相比,转染siR-TSPAN8的细胞TSPAN8的mRNA及蛋白表达均下调.与PBMC共培养实验结果显示下调TSPAN8后免疫细胞杀伤水平显著增加.流式细胞仪检测结果显示,下调TSPAN8增加共培养PBMC细胞中CD8+T细胞比例,同时抑制肿瘤细胞PD-L1表达水平.结论 Tetraspanin 8通过调控三阴乳腺癌细胞PD-L1的表达,影响抗肿瘤免疫反应.
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