换一批摘要目的 构建带有FLAG标签的BPIFC基因真核表达载体,建立稳定转染BPIFC基因的HaCaT细胞系.方法 设计引物通过PCR扩增出BPIFC基因片段,利用DNA重组技术将该基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定.验证正确的重组质粒通过PI Max线性转染的方法转染至HaCaT细胞,通过G418筛选建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系,并通过RT-PCR法和Western-blot法分别测定BPIFC mRNA和蛋白的表达量.结果 双酶切和DNA测序结果表明,pcDNA3.1-BPIFC真核表达质粒构建成功.RT-PCR结果表明,重组质粒的mRNA表达量高于空载转染组和空白对照组;Western-blot结果显示,BPIFC融合蛋白在HaCaT细胞中成功表达.结论 成功建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系,可表达带有FLAG亲和标签的BPIFC蛋白用于后续实验研究.
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分类号
G782
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-4287.2024.10.014
发布时间
2024-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
福建省自然科学基金项目（2021J011162）
宁德师范学院创新团队项目（2021T10）
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