换一批炭疽芽孢杆菌微滴式数字PCR定量检测方法的建立
Establishment of droplet digital PCR detection method for Bacillus anthracis
摘要目的 建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法 对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持.方法 以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法;对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果,分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性.结果 建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900 nmol·L-1和250 nmol·L-1,最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12 copies μL-1,未发现与常见疫病存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5％.结论 本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术.
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关键词
炭疽芽孢杆菌微滴式数字PCR平板计数定量评估核酸检测Bacillus anthracisdroplet digital PCRPlate countingQuantitative evaluationnucleic acid test
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-4287.2025.01.014
发布时间
2025-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（2018ZX10734401-010）
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