换一批
换一批鸡星状病毒、禽肾炎病毒和鸡传染性支气管炎病毒多重PCR检测方法的建立
Development of a Multiplex PCR to Discriminate Chicken Astrovirus,Avian Nephritis Virus and Infectious Bronchitis Virus
摘要为有效确定引起鸡痛风的病原,本试验建立了同时检测鸡星状病毒(CAstV)、禽肾炎病毒(ANV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的多重PCR方法.针对IBV的N基因、CAstV和ANV的ORF-1b基因分别设计了 3对特异性引物,通过优化退火温度等反应条件建立了多重PCR检测方法,并评估了该方法的特异性和敏感性,而后对临床痛风样本进行了检测.结果显示,多重PCR方法对3种病毒扩增产物的大小分别为1 600 bp(IBV)、794 bp(ANV)和350 bp(CAstV);该多重PCR检测禽马立克氏病毒、血清4型禽腺病毒、减蛋综合征病毒和J亚型禽白血病病毒均为阴性;病毒最低检测限IBV为1.96×102 copies/μL,ANV 为 2.10×102 copies/μL,CAstV 为 1.33×105copies/μL;多重 PCR 对临床病料的检测结果与单项PCR的检测结果一致.结果表明,本试验建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和可靠性,为临床鸡痛风的诊断提供了准确、有效的技术手段.
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