BHK-21细胞规模化培养鸡新城疫病毒工艺的研究和初步应用

Research and Preliminary Application of Large-scale Cultivation Process of Newcastle Disease Virus in BHK-21 Cells

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摘要为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养,本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了 1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株;使用该细胞以初始密度为100 ×104个/mL接种摇瓶进行培养,并对摇瓶培养鸡新城疫病毒HN2018株的接毒细胞密度、培养温度、接毒量、收毒时间等工艺参数进行摸索和优化;利用摇瓶优化的病毒培养工艺,在10和100 L生物反应器中逐级放大培养BHK-21-xh悬浮细胞,接种鸡新城疫病毒;采用生物反应器悬浮培养的鸡新城疫病毒HN2018株细胞毒与鸡胚毒分别制备成灭活疫苗,免疫SPF鸡进行免疫效力的比较.结果显示,在摇瓶中培养72 h细胞密度均不低于800 × 104个/mL,细胞活率均不低于96％;按照BHK-21-xh细胞密度不低于800 × 104个/mL,病毒感染复数(MOI)为0.216进行接毒,同时添加终浓度为20 μg/mL的胰蛋白酶,于35℃温度条件下培养64～72 h收获病毒液,鸡新城疫悬浮培养细胞毒红细胞凝集(HA)效价最高能够达到10log2.在生物反应器中接种鸡新城疫病毒,其HA效价均能达到10log2.细胞苗与鸡胚苗免疫效力相当,攻毒后均能获得100％保护,且免疫血清红细胞凝集抑制(HI)抗体效价均远高于新城疫国家标准.结果表明,应用细胞无血清全悬浮培养技术规模化培养鸡新城疫病毒HN2018株,生产工艺稳定,获得的抗原效价和纯度高,制备的灭活疫苗免疫效力良好,能够应用于新城疫疫苗的规模化生产.

作者周欣 ^[1] 丁丽萍 ^[2] 李庆东 ^[3] 侯乐孜 ^[4] 沈丹丹 ^[1] 李双双 ^[2] 姬星宇 ^[1] 张先锋 ^[5] 学术成果认领

作者单位 商丘美兰生物工程有限公司,河南商丘476200 ^[1] 河南普华基因科技有限公司,河南郑州450045 ^[2] 商丘市动物检疫和疫病预防控制中心,河南商丘476000 ^[3] 河南农业大学动物医学院,河南郑州450046 ^[4] 河南普华基因科技有限公司,河南郑州450045;河南农业大学动物医学院,河南郑州450046 ^[5]

关键词 BHK-21-xh细胞新城疫病毒生物反应器悬浮培养 BHK-21-xh cells Newcastle disease virus bioreactor suspension culture

分类号 S851.3

栏目名称 研究论文

发布时间 2023-08-29