绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立

Establishment of Indirect ELISA for Detection of Serum Antibody Against Chlamydophilia pecorum in Sheep

二维码有效期 120s

摘要为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法,本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒,经诱导表达和纯化后,对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定;以MOMP为包被抗原,通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、重复性和符合性,并进行临床样品检测.结果显示,MOMP以包涵体形式表达,经Western blot鉴定重组蛋白具有良好的反应原性.优化反应条件为:抗原包被浓度为1 mg/L,37℃静置孵育1 h;血清抗体稀释倍数为1∶100,37℃反应1 h;酶标二抗稀释倍数为1∶5 000,37℃孵育1 h;底物显色条件为37℃避光5 min.利用52份绵羊血清确定ELISA方法的阳性判定临界值为P/N=2.156.该方法的敏感性、特异性和重复性较高.用该方法与间接血凝试验对86份血清进行检测,两者符合率为73.2％.用该方法对临床采集的205份绵羊血清样品进行检测,阳性率为34.1％.结果表明,本试验建立的绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性,可应用于临床检测.