换一批
换一批采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
GFP-Tagged siRNA Screening for Inhibiting 3C Gene Expression of Multi-serotypes of FMDV
摘要为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia Ⅰ型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率.生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia Ⅰ型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果.qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85％,且作用可维持72 h.本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据.
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关键词
小干扰RNA(siRNA)口蹄疫(FMD)绿色荧光蛋白(GFP)多血清型3C基因small interfering RNA(siRNA)foot and mouth disease(FMD)green fluorescence protein(GFP)multiple serotypes3C gene
分类号
S855.3
栏目名称
发布时间
2023-10-09
基金项目
转基因生物新品种培育重大专项（2009ZX08007-005B）；
吉林省自然科学基金（20101590）
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