猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR(冻干型)检测方法的建立

Establishment of Real-time Fluorescence Quantitative PCR(Lyophilized Type)Detection Method for Feline Infectious Peritonitis Virus

二维码有效期 120s

摘要为了建立一种灵敏度高、无需冷链运输、操作简便的猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)检测方法,本试验以FIPV的N基因序列为靶基因,进行体外转录制备阳性参考品;筛选特异性引物和探针;对反应体系和条件进行优化;筛选适宜的冻干保护剂并对本试验方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估;对冻干体系进行稳定性试验,预测室温条件下的有效期;利用本试验方法和商品试剂盒对临床采集的11份确诊FIPV感染病料进行检测,对比二者检出率;绘制接受者操作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积,评估本试验方法的诊断效果,计算Cut off值.结果显示,本试验方法可特异性检出FIPV;最低检测限为43 copies/mL;组内和组间重复试验变异系数分别为0.12％～1.67％和0.03％～1.62％;室温有效期至少可达567 d;本试验方法的检出率为100％,市售试剂盒的检出率为91％;ROC曲线下面积为1,Cut off值为39.40.结果表明,本试验建立的FIPV实时荧光定量PCR(冻干型)检测方法具有灵敏度高,方便运输且易于贮藏的优势,可为FIPV的临床检测和流行病学调查提供技术支持.