马头山羊羊口疮病毒的分离鉴定及其B2L基因的特征分析
Isolation and Identification of ORFV in Matou Goats and Analysis of B2L gene
摘要为确定湖北省某马头山羊养殖场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原及其分子生物学特征.本试验利用牛睾丸细胞对马头山羊唇部痂皮病料进行病毒分离培养,通过细胞病变观察、病毒滴度测定、PCR扩增和测序等方法对分离毒株进行了鉴定.并采用MegAlign、MEGA 7.0、DNAMAN和Bioedit等软件分析了分离毒株和China Vaccine毒株B2L基因的核苷酸序列相似性,并预测了蛋白二级结构和疏水性.结果显示,接种病料上清液的牛睾丸细胞盲传5代后出现细胞病变,经PCR扩增的分离毒株B2L基因大小为1 137 bp;所分离羊口疮病毒(ORFV)病毒滴度可达105.5 TCID50/mL;分离毒株与AH1404、FJ-YX和GX-BH毒株B2L基因同源性为99.3%;与China Vaccine毒株同源性为89.5%.分离毒株与China Vaccine毒株B2L基因序列分析显示处在不同分支,两者存在8个位点突变(aa11、aa80、aa101、aa123、aa126、aa294、aa327和aa333);B2L蛋白为稳定的疏水性蛋白;分离毒株和China Vaccine毒株的蛋白二级结构存在差异.结果表明,该养殖场ORFV的B2L基因出现变异,有关部门应当加强对ORFV流行情况的监测.
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