换一批猫传染性腹膜炎病毒SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用
Establishment and Clinical Application of a SYBR Green Real-Time Fluorescence Quantitative PCR Detection Method for Feline Infectious Peritonitis Virus
摘要为了提高猫传染性腹膜炎(FIP)的临床检出率,本试验根据猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)M基因设计特异性引物,将扩增的目的基因连接到pMD19-T载体上,获得重组质粒并作为标准阳性模板,建立针对FIPV的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并对其特异性、敏感性、重复性和临床检出率进行验证.结果显示,本方法梯度稀释的标准品与Ct值呈良好的线性关系,R2=0.999 9,扩增效率为92.4%;与其他猫常见病毒未发生交叉反应;最低检测限为3.48×102 copies/μL,敏感性是普通PCR检测方法的100倍;该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2.4%;应用该方法对临床阳性样本的检出率为100%,阴性样本检出率为0.结果表明,本试验建立的SYBR Green qPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、临床检测效果佳,可用于FIPV的临床诊断.
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关键词
猫传染性腹膜炎病毒M基因SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)feline infectious peritonitis virusM geneSYBR Greenreal-time fluorescence quantitative PCR(qPCR)
分类号
S858.65
栏目名称
DOI
10.20157/j.cnki.zgsyzz.2025.03.006
发布时间
2025-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省普通高校动物干细胞工程技术研究中心项目（2021GCZX006）
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