换一批FHV-1和FCV双重TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立和应用
Establishment and Application of a Duplex TaqMan Real-Time Fluorescence Quantitative PCR Assay for FHV-1 and FCV
摘要为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV),本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC)基因(GenBank登录号:OR504662)和FCV的衣壳蛋白1(VP1)基因(GenBank登录号:OP904215)以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针,构建重组阳性质粒标准品pMD19-T-G、pMD19-T-P和pMD19-T-C,建立了双重TaqMan 实时荧光定量PCR方法.以重组阳性质粒标准品绘制标准曲线,验证该方法的特异性、灵敏性和重复性,利用建立的方法检测33份临床样本评估该方法的可行性,并对泰州市292份流浪猫眼口鼻分泌物样本进行检测.结果显示,本试验建立的双重TaqMan 实时荧光定量PCR方法具有良好的线性关系,对其他病原无交叉反应,对FHV-1和FCV的最低检测限均为1×101copies/μL,组内和组间的变异系数均小于2%;对33份临床样本的检测结果显示,FHV-1和FCV的阳性符合率为100%,FHV-1总符合率为93.9%,FCV总符合率为90.9%;292份流浪猫眼口鼻分泌物样本中,FHV-1阳性率为20.9%,FCV阳性率为46.2%,FHV-1和FCV混合阳性率为12.0%.结果表明,本试验建立的双重TaqMan实时荧光定量PCR,特异性强、灵敏度高、重复性好,为临床猫呼吸系统疾病病原鉴别诊断和宠物健康监测提供了技术支持.
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关键词
猫疱疹病毒1型(FHV-1)猫杯状病毒(FCV)实时荧光定量PCRfeline herpesvirus-1(FHV-1)feline calicivirus(FCV)real-time fluorescence quantitative PCR
分类号
S854
栏目名称
DOI
10.20157/j.cnki.zgsyzz.2025.05.007
发布时间
2025-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏农牧科技职业学院校级自然科学基金储备项目（NSF2023CB14）
江苏农牧科技职业学院校级自然科学基金储备项目（NSF2024CB06）
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