换一批PEDV、PoRV、PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法的建立和应用
Establishment and Application of Multiplex Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of PEDV,PoRV and PDCoV
摘要为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的同时鉴别检测,本试验根据PEDV核衣壳蛋白(N)基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白(M)基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针,通过矩阵法优化反应条件,建立多重荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,绘制标准曲线,验证该方法的特异性、敏感性和重复性,并进行临床样本检测.标准曲线拟合试验结果显示,PEDV、PoRV和PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法针对各病毒扩增均具有良好的相关系数和扩增效率;特异性试验结果显示,该方法仅对PEDV、PoRV和PDCoV呈现特异性扩增,不与其他猪源病毒发生交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对PEDV、PoRV和PDCoV的最低检测限均为1×100 copies/μL;组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2%,具有良好的重复性.对367份临床样本进行PEDV、PoRV和PDCoV检测,多重荧光定量RT-PCR检测的阳性率为92.37%(339/367),而地方标准多重RT-PCR检测的阳性率为83.38%(306/367),2种方法临床样本检测符合率为91.01%(334/367).结果表明,本试验建立了一种可快速、准确、灵敏检测PEDV、PoRV和PDCoV的多重荧光定量RT-PCR方法,可用于实验室病原和临床样本检测,为临床猪病毒性腹泻的研究和防控提供了有效技术方法.
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关键词
猪流行性腹泻病毒(PEDV)猪轮状病毒(PoRV)猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)逆转录聚合酶链式反应porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)porcine rotavirus(PoRV)porcine delta coronavirus(PDCoV)re-verse transcription polymerase chain reaction
分类号
S858.28
栏目名称
DOI
10.20157/j.cnki.zgsyzz.2025.09.009
发布时间
2025-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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