换一批重组抗菌肽LL-37的工程化制备、广谱抗菌活性和耐药性演化研究
Engineering Preparation,Broad-spectrum Antimicrobial Activity and Antimicrobial Resistance Evolution of Recombinant Antimicrobial Peptide LL-37
摘要为了构建抗菌肽(AMPs)LL-37的高效表达体系、优化制备工艺并系统评估其抗菌特性和生物安全性,本试验通过基因重组技术构建pET-32a-LL-37大肠杆菌表达体系,优化诱导表达条件[温度、时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度],纯化的重组LL-37经鉴定后,测定其对7种临床常见细菌的最小抑菌浓度(MIC)和抗菌率;采用连续传代试验,测定重组LL-37和抗生素对细菌传代前后的MIC值;采用细胞毒性试验测定重组LL-37的细胞毒性.结果显示,成功构建了重组pET-32a-LL-37大肠杆菌表达体系,最佳诱导温度为37℃、诱导时间为16 h、IPTG终浓度为0.6 mmol/L;重组LL-37对肠炎沙门菌的抗菌活性最强,MIC值为8 μg/mL,其次是金黄色葡萄球菌(MIC值为16 μg/mL)、肺炎克雷伯菌(MIC值为32 μg/mL)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MIC值为64 μg/mL)、铜绿假单胞菌(MIC值为64 μg/mL),对鲍曼不动杆菌和粪肠球菌的抗菌活性相对较差,MIC值分别为128和256 μg/mL;多种细菌在长期亚抑菌浓度重组LL-37暴露下,肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的耐药性增强,重组LL-37对两者的MIC值分别从32和64 μg/mL增至64和128 μg/mL,其余5种细菌未产生耐药性;重组LL-37在有效抗菌浓度下对人胚胎肾上皮293T细胞(HEK293T)和小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)无细胞毒性.综上所述,本试验所获得的重组LL-37对部分临床常见细菌具有高效抗菌活性,且耐药性风险可控,在安全浓度范围内具备局部应用潜力,为AMPs的规模化生产和抗耐药菌治疗策略的开发提供了参考依据.
更多相关知识
关键词
抗菌肽重组LL-37抗菌活性耐药性演化antimicrobial peptiderecombinant LL-37antimicrobial activityantimicrobial resistance evolution
分类号
S851.3
栏目名称
DOI
10.20157/j.cnki.zgsyzz.2025.12.009
发布时间
2025-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山东省外专双百计划团队项目（WST2019013）
山东省家禽产业技术体系（SDAIT-11-14）
- 浏览5
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
