换一批猪流行性腹泻病毒(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质的研制
Development of Inactivated Virus Reference Material for Procine Epidemic Diarrhea Virus(GHN/HB01 Strain)
摘要为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法检测PEDV N基因的绝对定量值以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室合作定值;进一步采用qPCR方法对该标准物质进行应用评估.结果显示,本试验建立并优化了PEDV ddPCR方法,制备的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质不存在外源病原体感染;组内和组间无显著性差异(P>0.05),均匀性好;该标准物质于-20℃稳定保存9个月,4℃稳定保存7 d,25℃稳定保存24 h,可反复冻融3次;该标准物质定值结果为(1.64±0.262 4)×103 copies/μL;应用评估证实,该标准物质在qPCR检测体系中表现可靠,适用性良好,可以用于qPCR检测.结果表明,本试验研制的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质具备准确的定值和良好的稳定性,可直接应用于检测试剂盒开发、实验室方法验证与质量控制全过程,是实现PEDV核酸检测标准化的关键物质基础.
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关键词
猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因微滴式数字PCR(ddPCR)标准物质定值porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)N genedroplet digital PCR(ddPCR)reference materialvalue assignment
分类号
S852.65
栏目名称
DOI
10.20157/j.cnki.zgsyzz.2026.01.006
发布时间
2026-01-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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