利拉鲁肽通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对高糖诱导的人足细胞自噬及凋亡影响的研究

Liraglutide in fluences human podocyte autophagy and apoptosis induced by high glucose through PI3K/Akt/mTOR pathway

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摘要目的探讨利拉鲁肽对高糖诱导的人足细胞自噬及凋亡的影响及作用机制.方法体外培养人足细胞分为正常对照(NC)组、高糖组(HG组)、25 nmol/L利拉鲁肽组(HG+Lir25 组)、50 nmol/L利拉鲁肽组(HG+Lir50 组)、利拉鲁肽+LY294002 组(HG+Lir+LY294002 组)和利拉鲁肽+3-MA组(HG+Lir+3-MA组).CCK-8 检测足细胞活力;流式细胞仪、Hoechst33342 染色分别检测足细胞凋亡率和凋亡形态学;透射电镜、免疫荧光染色分别观察足细胞中自噬小体和自噬标志物LC3 蛋白表达;Western blot法检测足细胞中凋亡、自噬和磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达.结果与NC组比较,HG组足细胞活力及Bcl-2、Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达降低(P＜0.05),凋亡率及Bax、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达升高(P＜0.05),可见较多胞核固缩的足细胞,自噬小体数量和LC3 蛋白的绿色荧光斑点数量减少.与HG 组比较,HG+Lir 25、HG+Lir 50 组足细胞活力、Bcl-2、Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达升高(P＜0.05),细胞凋亡率、Bax、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达降低(P＜0.05),减少胞核固缩的足细胞数量,增加自噬小体数量和LC3 蛋白的绿色荧光斑点数量,且HG+Lir 50 组上述指标变化更明显.与HG+Lir50 组比较,HG+Lir+LY294002、HG+Lir+3-MA组可调节PI3K/Akt/mTOR通路,且能减弱利拉鲁肽对高糖诱导的足细胞活力、凋亡和自噬的改善作用.结论利拉鲁肽可能通过PI3K/Akt/mTOR通路促进高糖诱导的人足细胞自噬并抑制其凋亡.